Para
poder ser estudiados con el microscopio, los tejidos de las
biopsias, piezas quirúrgicas o autopsias deben ser seccionados
en cortes muy delgados, generalmente de entre 3 y 6 micras
(milésimas de milímetro). Previamente es necesario conferirles
una consistencia homogénea mediante lo que llamamos:
PROCESO DE INCLUSIÓN.
Este se realiza habitualmente
mediante procesadores automáticos de tejidos y estaciones
de inclusión , aunque también puede hacerse en forma manual.
Existen varios tipos de procesos de inclusión. Los más habituales
son:
- Inclusión en parafina
Es el proceso que se utiliza habitualmente.Su
objetivo es sustituir el agua de los tejidos por parafina
liquida caliente (58º C) que al enfriarse adquirirá una
consistencia adecuada para el corte. Como la parafina
es insoluble en agua es preciso eliminar previamente esta
última del tejido, sustituyéndola inicialmente por alcohol
(deshidratación) y posteriormente por tolueno o xileno
(aclaramiento) que al ser solubles en parafina pueden
ser sustituidos finalmente por ella. Así se obtendrá un
tejido embebido en parafina que será introducido en moldes
con parafina liquida. Al enfriarse los moldes obtendremos
un "bloque de parafina" a partir del cual pueden
obtenerse las secciones.
- Otros métodos de inclusión
Metacrilato: Para estudio de biopsias
óseas no descalificadas.
Resinas (epon): Microscopía electrónica
Congelación: El tejido en fresco es
congelado a temperaturas entre -20º a -40º. Este tipo de
inclusión se usa en las biopsias peroperatorias y en técnicas
especiales
CORTE
A partir de los bloques se obtienen cortes
muy finos, de 3 a 10 micras de espesor. El corte se realiza
mediante unos aparatos llamados microtomos.
Una vez obtenidos los cortes se extenderán
en un baño de agua caliente y fijaran sobre un portaobjetos
para despues ser teñidos con las técnicas necesarias.
TINCIÓN
Los cortes obtenidos son tratados mediante
un proceso de "desparafinado" para eliminar la parafina
y volver a sustituirla por agua, siendo posteriormente teñidos.
La técnica de tinción mas conocida, utilizada siempre como
técnica de rutina, es la Hematoxilína-Eosína
Existen muchas otras técnicas de tinción
histológica con utilidades especificas. Las más frecuentemente
utilizadas son:
- Tricrómico de Masson: marca con colores
diferentes el músculo, colágeno y núcleo.
- PAS: glucógeno, moco, hongos, otras
estructuras y sustencias.
- Azul-Alcián: mucopolisacáridos ácidos.
- Gomori: fibras de reticulína.
- Sudan Oil red-O: grasas
- Plata metenamína: membranas basales,
hongos.
- Perl´s: hierro.
- Orceina de Van Gieson: fibras elásticas.
- Von Kossa: calcio.
- Rojo Congo: sustancia amiloide.
- Fontana-Masson: melanína.
- Ziehl-Neelsen: bacilos ácido alcohol
resistentes.
MONTAJE DE LAS PREPARACIONES
Tras su tinción, los cortes histológicos
son cubiertos con una lamina muy fina de cristal o material
plástico llamada cubreobjetos previa aplicación de un medio
liquido transparente de montaje que posteriormente se solidificará,
quedando listos para ser estudiados con el microscopio óptico.
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